Introdução: A estenose aórtica devido à remodelação deletéria da valva aórtica é um problema de saúde, pois só pode ser corrigida pela substituição valvar devido ao pouco conhecimento dos mecanismos celulares envolvidos. As células intersticiais valvulares fibroblásticas (VICs) desempenham um papel central na rigidez do folheto valvar por meio da transdiferenciação em células semelhantes aos osteoblastos, levando à calcificação. Foi demonstrado que o canal catiônico TRPM4 (potencial receptor transitório de melastatina 4) participa da remodelação dos fibroblastos cardíacos. Também está envolvido na remodelação da válvula aórtica induzida por radiação in vivo em camundongos. Nossa hipótese é que o TRPM4 possa participar da transição humana VIC para o fenótipo osteoblástico.

Métodos: As válvulas aórticas humanas foram coletadas de pacientes submetidos à substituição cirúrgica da válvula. As VICs isoladas foram mantidas 14 dias em cultura em meio padrão ou pró-calcificante e submetidas ao inibidor de TRPM4, 9-Fenantrol, ou RNA-TRPM4 em forma de gancho pequeno. A diferenciação osteogênica foi avaliada medindo os cristais de hidroxiapatita pela coloração vermelha com alizarina e a expressão proteica de marcadores osteogênicos.

Resultados: Western blot em VICs revelou que a expressão da proteína TRPM4 e a funcionalidade do canal foi confirmada por gravações de patch-clamp exibindo uma corrente catiônica sensível à voltagem e CA^{2+FECHAMENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_ENTO_TEXTO_SUPERIOR. Os VICs mantidos em meio pró-calcificante exibiram uma mineralização maior do que em meio padrão, com um aumento nos marcadores osteogênicos. A mineralização e os marcadores osteogênicos (proteína morfogenética óssea 2, fator de transcrição 2 relacionado ao ciclo) diminuíram quando o meio pró-calcificante continha 9-fenantrol ou um pequeno RNA-TRPM4 em forma de gancho. Da mesma forma, o SMAD1/5 e o fator nuclear das vias de células T ativadas foram estimulados em condições de meio pró-calcificante em comparação com o meio padrão, mas reduzidos por 9-fenantrol ou RNA-TRPM4 em forma de gancho pequeno.}

Conclusões: TRPM4 participa da diferenciação osteogênica de VICs humanos e, portanto, aparece como um alvo para prevenir a remodelação da valva aórtica.

Palavras-chave: TRPM4; estenose aórtica; células intersticiais valvulares.