Antecedentes: A ativação plaquetária depende de mudanças no fluxo citoplasmático de cálcio. No entanto, pouco se sabe sobre o papel que o fluxo mitocondrial de cálcio desempenha na ativação plaquetária. A ativação induz a liberação de cálcio dos estoques intracelulares, que entra na matriz mitocondrial por meio do MCU (uniportador de cálcio mitocondrial) para regular a bioenergética e a formação de espécies reativas de oxigênio (ROS), conforme demonstrado em outras células. No entanto, não está claro se o MCU contribui para a função plaquetária.

Métodos: Geramos camundongos com deficiência de MCU específico de placas (Mcu ^PLT) e comparamos com litter_superior (controles do tipo selvagem mate) (Mcu ^{) Superior) superior (plt+/+}). As abordagens in vitro avaliaram o fluxo de cálcio mitocondrial e as respostas de ativação plaquetária à estimulação de receptores imunorreceptores baseados em tirosina (ITAM) e GPCRs (receptores acoplados à proteína G). Além disso, examinamos hemostasia e trombose in vivo. Também tratamos placas humanas com inibidores de MCU e a função plaquetária foi avaliada.

Resultados: Mcu ^{PLT plaquetas reduziu significativamente o fluxo mitocondrial de cálcio em resposta à ativação dos receptores ITAM, enquanto o fluxo de cálcio mitocondrial em resposta à ativação do GPCR permaneceu inalterado. A agregação plaquetária foi significativamente reduzida pela ativação do ITAM nas placas Mcu plt-/-, mas a agregação induzida por GPCR permaneceu inalterada. Achados semelhantes foram observados quando o MCU foi inibido em placas humanas. In vivo, camundongos Mcu plt-/- tiveram trombose arterial reduzida e menos lesão cerebral isquêmica por AVC. A hemostasia foi levemente alterada em camundongos Mcu plt-/-. Mecanicamente, a geração de ROS mitocondrial foi significativamente reduzida nas placas Mcu pltfechamento_superior-/ em comparação com Mcu plt+/+fechamento_superior superior texto_superiorplt+/+plt+/+plt+/+}plt+/+plt+/+plt+/+fechamento_texto_texto_texto_texto_texto_superior superior plt+/+plt+/+fechamento_ texto_superiorplt+/+plt+/+plt+/+plt+/+plt+/+++plt+/+fechamento_texto_texto_texto_superior _ superior plt+/+plt+/+plt+/+fechamento_superiorplt+/+plt+/+fechamento_superiorplt+/+plt+/ + fechamento_ texto_superiorplt+/ + plt+/ + plt+/ + plt+/ + fechamento_textoplt+/ + fechamento_textoplt+ /Aquetas ento_texto_superior após ativação dependente do ITAM, não ativação do GPCR. A redução do ROS mitocondrial foi associada à diminuição da sinalização ITAM com base em p-SYK (fosfo-baço tirosina quinase) e p-PLCγ2 (fosfofosfolipase C-gama 2) em Mcu ^{plt_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_texto_superior_superior_superior_superior_superior_superior_texto_superior_superior_superior_superior_superior_texto_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_texto_superior_superior_superior_superiorSuperior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superiorSuperior_ superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_ Superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superiorsuperior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_ superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_ Superior Superior _ _superior_abertura__superior_abertura_superior_superior__superior_superior_superior_superior__superior_superior_abertura_superior_superior_superior Abertura_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_Superior_ Texto superior_superior_superior_superior__superior__superior_superior_abertura_superior_superior_superior_superior_superior__superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior__superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior__superior_superior_superior__superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superior_superiou superior_ plaquetas superior_superior_superior_superior_superior _Superior-fechamento_} texto_superior. A inibição das ROS mitocondriais diminuiu a agregação, bem como a sinalização ITAM a jusante nas placas Mcu ^plt+/+. Por outro lado, tratar Mcu ^plt-/- com mitoparaquat para induzir ROS mitocondrial aumentou a agregação e sinalização plaquetárias dependentes do ITAM.

Conclusões: Nossos dados apoiam o papel do fluxo mitocondrial de cálcio na regulação da ativação plaquetária dependente do ITAM por meio da geração de ROS mitocondriais.

Palavras-chave: ITAM; mitocôndrias; plaquetas; trombose.