A fibra de algodão (Gossypium hirsutum) é uma célula única altamente alongada com uma parede celular espessada. Os fatores de transcrição MYB são reguladores importantes do alongamento das células vegetais; no entanto, o mecanismo molecular envolvido na regulação do alongamento das fibras ainda precisa ser explorado. Aqui, apresentamos evidências de que o fator de transcrição R2R3-MYB gHMYB4 regula negativamente o alongamento das células de fibra de algodão ao suprimir a expressão de 2 genes cruciais relacionados anteriormente como afetando o desenvolvimento da fibra: proteína de transferência de lipídios 4 (GHLtP4) e transportador de sacarose 12 (GHSweet12). GhMyB4 é preferencialmente expresso em células de fibra alongadas. A eliminação de gHMyB4 no algodão resulta em células de fibra mais longas, enquanto a superexpressão de gHMyB4 em Arabidopsis leva à redução da altura da planta e do comprimento da raiz. Análises transcriptômicas e lipidômicas revelaram que o GhMyB4 está envolvido na coordenação de 3 processos biológicos interconectados, a saber, regulação do conteúdo lipídico, sinalização de auxina e metabolismo do açúcar. Além disso, mostramos que GHMyB4 inibe a expressão GHLTP4 e GHSweet12 ao se conectar ao elemento cis MYB (TTTAGTG) em seus respectivos promotores. Curiosamente, o fator básico de transcrição hélice-alça-hélice 105 (gHbHLH105) e o fator de transcrição MYB 212 (gHMyB212) neutralizam os efeitos inibitórios do gHmyB4 na expressão de GHLTP4 e GHSweet12, respectivamente. Essas descobertas fornecem informações sobre os complexos mecanismos moleculares que regulam o alongamento das células vegetais.