Introdução: As células estromais mesenquimais (MSCs) possuem fortes propriedades imunomoduladoras, tornando-as candidatas atraentes para a medicina regenerativa e terapias relacionadas ao sistema imunológico. Foi demonstrado que a pré-ativação ou licenciamento de MSCs com citocinas como interferon-gama (IFN-γ) e fator transformador de crescimento beta 1 (TGF-β1) aumenta sua eficácia imunossupressora. A atenção recente se voltou para as vesículas extracelulares (EVs) liberadas por MScs licenciadas como uma alternativa terapêutica livre de células.
Métodos: Pequenos EVs foram isolados de MSCs licenciados com uma combinação de IFN-γ e TGF-β1. Esses EVs foram caracterizados de acordo com critérios padronizados. Seus efeitos imunomoduladores foram avaliados in vitro usando dois modelos imunes humanos: um sistema de polarização de macrófagos derivado de THP-1 e um ensaio de co-cultura de células mononucleares do sangue periférico (PBMC). A secreção de moléculas pró/anti-inflamatórias, a proliferação de células T e a indução regulatória de células T foram quantificadas. A redução da dimensionalidade usando incorporação estocástica de vizinhos distribuídos em t (t-SNE) foi aplicada a dados de citometria de fluxo multiparamétrica para o perfil imunológico. Além disso, conjuntos de dados transcriptômicos disponíveis publicamente (GSE122091 e GSE46019) foram analisados para identificar genes diferencialmente expressos (DEGs) em MSCs licenciadas por IFN-γ e TGF-β1, fornecendo informações sobre os potenciais impulsionadores moleculares da imunorregulação mediada por EV.
Resultados: Os EVs licenciados pela inibiram significativamente a ativação pró-inflamatória dos macrófagos THP-1 e promoveram um fenótipo antiinflamatório, com redução da secreção do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) e da interleucina-1 beta (IL-1β), aumento da produção de IL-10 e diminuição dos níveis de óxido nítrico (NO).. Em comparação com EVs de MSCs não licenciadas, os EVs licenciados induziram uma proporção maior de células T reguladoras e exibiram maior supressão da proliferação alogênica de células T. A análise de t-SNE revelou uma assinatura imunorregulatória distinta induzida por EVs licenciados, caracterizada pelo surgimento de um subconjunto de linfócitos não proliferativos com elevada coexpressão de CD4, CD25 e FOX. P3. A análise transcriptômica revelou ainda sete DEGs sobrepostos entre MSCs licenciadas por IFN-γ e TGF-β1, incluindo genes regulados positivamente (GPR68, LIMK2, LIPG) e regulados negativamente (EFNA5, PRKG1, DCLK1, TRIM2), dos quais estão vários funcionalmente implicados na regulação imune mediada por EV.
Conclusões: Pequenos EVs derivados de MSCs licenciados por IFN-γ e TGF-β1 demonstram tendências imunomoduladoras dependentes da dose in vitro, com efeitos aprimorados observados em concentrações mais altas. Essas descobertas sugerem sua utilidade potencial na modulação das respostas imunes inatas e adaptativas, justificando uma investigação mais aprofundada para sua aplicação como estratégia terapêutica livre de células em condições imunomediadas.
Palavras-chave: Licenciamento de citocinas; vesículas extracelulares (EVs); imunomodulação; células estromais mesenquimais (MSCs); células T regulatórias (Treg); fator de crescimento transformador beta 1 (TGF-β1); fator de necrose tumoral alfa (TGF) F) F) F) F) F) F) F-β1) F-β1) NT) F-α); t-análise de incorporação estocástica distribuída de vizinhos (t-SNE).
